¹⁸F-氟代葡萄糖正电子发射断层扫描计算机层析成像(X射线)技术(¹⁸F-FDG-PET/CT)是一种先进的分子成像诊断技术，通过先进的分子、功能、代谢成像与经典的解剖、形态、密度显示相互结合，可以无创、定量、动态地对受检者体内经正电子标记的放射性药物进行监测，从分子水平对活体内生理和生化的改变进行早期诊断。目前，这一技术主要用于早期发现肿瘤、鉴别肿瘤良恶性、寻找原发灶、更全面了解全身恶性肿瘤患者病变情况及疗效评估和复发监测等。此外，越来越多的研究表明，其亦可用于其他非肿瘤性疾病的早期发现^{[1, 2]}。有研究认为，PET/CT受检者所受剂量不高，检查安全，不良反应轻^{[3, 4]}。本研究以日本大耳白兔为研究对象，观察其经长期¹⁸F-FDG-PET/CT检查后机体部分免疫指标的变化。

1.实验动物：健康雄性成年日本大耳白兔，购自济南西岭角养殖繁育中心，许可证号SCXK(鲁)2010-0005，体重2.0～2.5 kg/只，饲养温度25℃，湿度60%～70%。实验经所在单位动物伦理委员会批准。

2.仪器与试剂：PET-CT机(Minitrace，美国GE公司)，CRS-3I水箱(美国MED-TEC公司)，Discovery-LS PI-T/CT(美国GE公司)，7180型全自动生化检测仪(日本日立公司)。CD4+抗体、CD8+抗体、肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体、白介素1β(IL-1β)均购自美国BD Pharmingen公司。¹⁸F-FDG、磷酸盐缓冲液(PBS)本院自行生产配置。

3.动物分组及处理：将白兔按随机数字表法分为健康对照组和实验组，每组各18只。实验组动物禁食6 h后静脉留置针注射¹⁸F-FDG示踪剂(222 MBq)，动物随后在安静、暗光条件下休息40 min后行全身¹⁸F-FDG-PET/CT显像。实验组动物每天进行1次CT扫描，每周连续进行5 d，共照射3个月。分别于第1、2和3个月末取动物组织检测，每次6只，健康对照组未给予照射。各项实验重复3次。

4.白细胞数测定：用微吸管取动物耳静脉血液加入有1％HCl的干净PE管中，使溶液混匀，破碎红细胞。微吸管每吸完1个血样后，分别用水、乙醚试剂、纯乙醇试剂依次清洗。准备干净的血细胞计数板和盖玻片，用干净吸管吸取溶液，轻轻在侧面滴加，之后显微镜下计数白细胞数。

5.动物胸腺与脾脏指数测定：动物取血后颈椎脱臼处死，取脾脏、胸腺，分析天平称胸腺、脾脏质量。通过以下公式计算脏器指数：

6.腹腔巨噬细胞吞噬功能测定：将鸡红细胞注入兔腹腔，待巨噬细胞吞噬鸡红细胞后4 h，取动物腹腔液涂片，自然干燥，经染色后在油镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况，计算吞噬指数与吞噬百分率，以此评价吞噬细胞的吞噬功能。

7.外周血免疫T细胞亚群的检测：取动物外周血约500 μl置于肝素抗凝的EP管中，依据外周血WBC计数，按照抗体所需标准量分别加入CD4+抗体、CD8+抗体各0.625 μl，常温避光孵育30 min，按比例加入红细胞裂解液，振荡混匀，常温避光，孵育15 min，溶血。加PBS终止，离心半径10 cm，3 000 r/min，离心8 min，弃上清，用250 μl PBS重悬细胞，加入150 μl 4%多聚甲醛混匀后用流式细胞仪进行分析，检测CD4+、CD8+T细胞数量，计算CD4+/CD8+比值。

8.动物血清IgG、IgA、IgM含量测定：动物股动脉取血0.5 ml，离心半径10 cm，4 000 r/min，离心10 min，取血清，自动生化仪上用免疫比浊法分别测定IgG、IgA、IgM含量。

9.动物血浆TNF-α、IL-1β水平测定：收集兔血浆，应用免疫印迹试验裂解细胞，将分离的蛋白条带通过湿法转至PVDF膜上，分别加入第一抗体TNF-α和IL-1β，经孵育、洗涤、显色、显影、定影步骤后检测TNF-α、IL-1β蛋白表达。

10.统计学处理：数据以x± s 形式表示。使用SPSS 13.0软件进行分析。Bonferroni Test进行多个样本间的两两比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

1.辐射对兔白细胞数、脾脏和胸腺指数的影响：结果见表 1。由表 1可知，与正常对照组比较，连续辐射2个月至3个月后兔白细胞总数出现增加，而脾脏和胸腺指数却出现下降，且显示出一定的量效关系，差异有统计学意义(t=3.144～72.903，P＜0.05)。

表 1(Table 1)

表1 辐射对兔白细胞总数、脾脏和胸腺指数的影响Table 1 Effects of radiation on the total number of cells, spleen and thymus index (x± s ) 组别 只数 白细胞总数 (×109/L) 脾脏指数 (mg/g) 胸腺系数 (mg/g) 健康对照组 18 9.42±0.12 4.54±0.18 0.71±0.01 实验组 照射1个月 18 10.87±0.17a 3.94±0.22a 0.62±0.01a 照射2个月 18 12.22±0.21b 3.11±0.23 0.55±0.03b 照射3个月 18 14.38±0.11c 2.29±0.17b 0.37±0.25c 注：a与健康对照组比较，t=48.369、9.015、20.687，P < 0.05；b与实验组照射1个月比较，t=20.869、25.238、7.565，P < 0.05；c与实验组照射2个月比较，t=38.420、3.144，P < 0.05

表 1 辐射对兔白细胞总数、脾脏和胸腺指数的影响 Table 1 Effects of radiation on the total number of cells, spleen and thymus index

2.辐射对兔巨噬细胞吞噬功能的影响：结果见表 2。由表 2可知，照射1个月后巨噬细胞吞噬百分率、照射2和3个月后的吞噬指数与吞噬百分率与正常对照组比较均出现下降，差异有统计学意义(t=2.719～11.859，P＜0.05)。

表 2(Table 2)

表 2 辐射对兔巨噬细胞吞噬功能的影响Table 2 Effects of radiation on phagocytic function of rabbit macrophage (x± s ) 组别 只数 吞噬指数 吞噬百分率(%) 健康对照组 18 1.02±0.01 41.75±2.87 实验组 照射1个月 18 0.82±0.03 35.13±2.11a 照射2个月 18 0.69±0.18a 32.21±4.03b 照射3个月 18 0.48±0.12b 27.87±3.28c

表 2 辐射对兔巨噬细胞吞噬功能的影响 Table 2 Effects of radiation on phagocytic function of rabbit macrophage

3.辐射对T细胞亚群的影响：结果见表 3。由表 3可知，与正常对照组比较，辐射后，兔CD4+(2~3个月)出现明显升高，而CD8+(1~3个月)出现降低，导致CD4+/CD8+比值明显增加，差异有统计学意义(t=6.433～29.877，P＜0.05)。

表3(Table 3)

表 3 辐射对兔外周血T细胞亚群及其比值的影响Table 3 Effects of radiation on T-lymphocyte subsets and their ratio in peripheral blood of rabbits (x± s ) 组别 只数 CD4+ CD8+ CD4+/ CD8+ 健康对照组 18 30.21±2.87 68.02±3.24 0.44±0.09 实验组 照射1个月 18 33.29±2.09 60.75±2.17a 0.55±0.12 照射2个月 18 50.10±3.26a 49.75±2.82b 1.02±0.21ab 照射3个月 18 59.12±3.11ab 41.23±1.97c 1.44±0.18c a与健康对照组比较，t=19.432、29.005、7.906、10.596，P < 0.05；b与实验组照射1个月比较，t=29.877、13.111、8.188，P < 0.05；c与实验组照射2个月比较，t=10.492、6.433，P < 0.05

表 3 辐射对兔外周血T细胞亚群及其比值的影响 Table 3 Effects of radiation on T-lymphocyte subsets and their ratio in peripheral blood of rabbits

4.辐射对兔血清IgG、IgM、IgA含量的影响：结果见表 4。由表 4可知，辐射后动物血清中IgG含量随照射时间增加而下降，呈现量效关系，不同实验组间差异有统计学意义(t=4.577～28.775，P＜0.05)。IgA含量在照射两个月后出现明显降低(t=2.720～28.775，P＜0.05)。IgM含量在照射2个月和3个月组间差异不明显。

表 4(Table 4)

表 4 辐射对兔血清 IgG、IgM、IgA 含量的影响Table 4 Effects of radiation on the content of IgG, IgA and IgM in rabbit serum (g/L,x± s ) 组别 只数 IgG IgM IgA 健康对照组 18 6.44±0.58 0.71±0.01 0.92±0.02 实验组 照射1个月 18 5.72±0.34a 0.56±0.02a 0.82±0.23 照射2个月 18 4.28±0.82b 0.37±0.29b 0.69±0.18a 照射3个月 18 3.31±0.24c 0.29±0.39 0.42±0.22b a与健康对照组比较，t=4.577、28.775、5.371，P < 0.05；b与实验组照射1个月比较，t=6.830、2.720、5.382，P < 0.05；c与实验组照射2个月比较，t=4.824，P < 0.05

表 4 辐射对兔血清 IgG、IgM、IgA 含量的影响 Table 4 Effects of radiation on the content of IgG, IgA and IgM in rabbit serum

5.辐射对兔血清TNF-α，IL-1蛋白表达的影响：结果见图 1。实验组的表达较与正常对照组比较，在照射1~3个月后兔血清TNF-α，IL-1表达量明显增加。

图 1(Figure 1)

注：1.实验组照射3个月；2.实验组照射2个月； 3.实验组照射1个月；4.健康对照组 图 1 辐射对兔血清TNF-α，IL-1蛋白表达的影响 Figure 1 Effect of irradiation on the expressions of TNF- alpha and IL-1 in rabbit serum

机体免疫器官由骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结、淋巴样组织等组成，免疫器官既是免疫细胞发生、分化、成熟的场所，也是免疫反应进行的地点^[5]。免疫器官的脏器指数是衡量机体免疫功能的初步指标，脏器指数的异常，可旁证组织学病理改变，胸腺和脾脏作为机体的主要免疫器官，本实验发现，经长时间¹⁸F-FDG-PET/CT照射后，兔的白细胞数，胸腺指数和脾脏指数都有所下降，提示¹⁸F-FDG-PET/CT对动物免疫器官有一定损伤。

单核-巨噬细胞系统是机体免疫系统的重要组成部分，除具吞噬、杀伤和清除异物的作用外，在调节机体免疫平衡方面也具有重要作用^[6]。单核-巨噬细胞吞噬功能可反映机体非特异性免疫功能状况。功能缺陷时，易发生感染、肿瘤及自身免疫性疾病等。巨噬细胞通过分泌IL-1和TNF-α来实现免疫调节作用。IL-1可促进T和B细胞的增殖和分化，刺激造血干细胞并参与炎症反应^[7]。TNF-α具有参与炎症反应、发热和杀死肿瘤细胞的作用。免疫球蛋白由B淋巴细胞产生，普遍存在于血液、组织液、分泌液中，IgG、IgM、IgA对人体的免疫功能有重要作用，在机体的非特异性免疫中发挥重要作用^[8]。本实验结果表明，经过¹⁸F-FDG-PET/CT照射后，兔吞噬指数和吞噬百分率、兔血清的IgG、IgM、IgA含量均出现下降，且与辐射剂量有一定效应关系，提示，长期¹⁸F-FDG-PET/CT扫描对机体的免疫系统及免疫蛋白均有一定的损伤。